厦门悬浮细胞凋亡检测技术_上海悬浮细胞凋亡检测蛋白_深圳市安培生物科技有限公司

　　试剂盒组份：Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号：FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号：PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号：BU002/4ml/10ml/20ml/4°C所需实验器材：微量移液器；PBS；不含EDTA的胰酶消化液；低速离心机；流式细胞仪注意事项：此试剂盒仅供研究使用.

　　2）用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清.3）再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清.b)贴壁细胞：1）吸出细胞培养液至离心管中，PBS洗涤贴壁细胞一次，加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞.2）室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，吸除胰酶细胞消化液！需避免胰酶的过度消化！3）加入以上步骤中收集的细胞培养液，稍混匀，转移到离心管内，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清.

　　因此采用AnnexinV与PI双染的方法，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来！试剂盒组份：Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号：FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号：PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号：BU002/4ml/10ml/20ml/4°C操作说明：细胞样品的准备：a)悬浮细胞：1）收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min，小心去除上清.

　　AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒包装规格产品货号：An0020、An0050、An0100规格：20T、50T、100T储存条件4ºC保存，一年有效产品介绍：磷脂酰丝氨酸（PS）是一种带负电荷的磷脂，正常细胞中，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧，使PS暴露在细胞膜外表面！AnnexinV是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合.

　　因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光（FITC）标记，以标记了的AnnexinV作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生.碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红!

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　　注：加入的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞，另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶；残留的胰酶会消化并降解后续加入的AnnexinV-FITC导致染色失败!4）用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清！5）再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞，1000-2000rpm离心5min，小心吸除上清!用去离子水按1：4稀释BindingBuffer（4mlBindingBuffer+12ml去离子水）；用250ul结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml；取100ul的细胞悬液于5ml流式管中，加入5ulAnnexinV-FITC，轻轻混匀；室温(20-25℃)避光孵育10min；上机前5min加入10ul碘化丙啶溶液，轻轻混匀；上机前在反应管中补加400ulPBS重悬细胞，避光保存，随即进行流式细胞仪（FACS）检测，AnnexinV-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光。

　　微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用。PropidiumIodide（PI）有毒，操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触.AnnexinV-FITC中含有剧毒成分叠氮化钠（NaN3）,操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。本试剂盒用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1x106!染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。AnnixinV检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞，如：淋巴细胞等细胞的检测！ 在花卉技术员的指导下，2011年年初，大余县黄龙镇旱田花卉基地花农李中明对1000多盆三年生的富贵籽进行新法扦插繁殖。当年3月，李中明首次扦插繁殖了2000多株，一个月后全部生根移栽上盆。到2012年年初绝大多数都抽出了果枝，一般抽出3-5个果枝，多的达7-8个果枝，立夏过后全部开花结果。这2000多盆富贵籽高不超过20厘米，冠径也不超过20厘米，可果实却结得不少，红果垂枝，绚丽多姿，因而被冠名为“迷你型”富贵籽。李中明培育成功的“迷你型”富贵籽很快成为市场走俏的“新宠”，吸引了众多花卉界同仁的关注，前去李中明花圃参观学习、购买的花农和外地客商络绎不绝。这一扦插繁殖方法很快在全县推广。大余县花农开始用塑料营养杯装培养基质直接扦插繁殖，这样可以从栽培到下一年开花结果一步到位上市销售，从生长到开花结果期由3年缩短到1年。