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广州annexin v-fitc细胞凋亡检测方法有哪些_广州肿瘤细胞凋亡检测方法有哪些_深圳市安培生物科技有限公司

来源:深圳市安培生物科技有限公司 发布时间:2021-10-12 点击:1100 点赞: 50
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  试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C所需实验器材:微量移液器;PBS;不含EDTA的胰酶消化液;低速离心机;流式细胞仪注意事项:此试剂盒仅供研究使用.

  因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光(FITC)标记,以标记了的AnnexinV作为探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生!碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

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  注:加入的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞,另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶;残留的胰酶会消化并降解后续加入的AnnexinV-FITC导致染色失败.4)用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!5)再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清.用去离子水按1:4稀释BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml去离子水);用250ul结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml;取100ul的细胞悬液于5ml流式管中,加入5ulAnnexinV-FITC,轻轻混匀;室温(20-25℃)避光孵育10min;上机前5min加入10ul碘化丙啶溶液,轻轻混匀;上机前在反应管中补加400ulPBS重悬细胞,避光保存,随即进行流式细胞仪(FACS)检测,AnnexinV-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光!

  因此采用AnnexinV与PI双染的方法,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来!试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C操作说明:细胞样品的准备:a)悬浮细胞:1)收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min,小心去除上清。

  AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒包装规格产品货号:An0020、An0050、An0100规格:20T、50T、100T储存条件4ºC保存,一年有效产品介绍:磷脂酰丝氨酸(PS)是一种带负电荷的磷脂,正常细胞中,PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜PS由脂膜内侧翻向细胞膜外侧,使PS暴露在细胞膜外表面!AnnexinV是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合!  南昌市西湖区疾控中心检验科的实验员,对厨房的冰箱、微波炉、菜罩和菜板等做了实验,结果发现菜板是最脏的!实验员用浸泡在无菌生理盐水中的无菌棉签依次涂抹在厨房内的冰箱、微波炉、菜罩和菜板上,然后将棉签放进试管里,在试管中注入10毫升浓度为0.9%的无菌生理盐水,再从试管中取出1毫升溶液,倒在无菌平板上,加入培养基。经过48小时培养,每个平板中均有白色斑点,这是培养后形成的菌落,有多少个菌落就有多少个白点。结果显示,冰箱、微波炉和菜罩分别为39、20和19个,而菜板上的不可计数。