当前位置: 首页 > 新闻资讯 > 郑州悬浮细胞凋亡检测蛋白_厦门细胞凋亡检测实验步骤_深圳市安培生物科技有限公司

新上线产品小门户来看看吧!

郑州悬浮细胞凋亡检测蛋白_厦门细胞凋亡检测实验步骤_深圳市安培生物科技有限公司

来源:深圳市安培生物科技有限公司 发布时间:2021-10-12 点击:1100 点赞: 50
联系:郑华伟 手机:19126518388 地址:深圳市宝安区新安街道宝民社区创业二路5号建设银行楼创业二路5-1

  注:加入的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞,另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶;残留的胰酶会消化并降解后续加入的AnnexinV-FITC导致染色失败!4)用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!5)再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!用去离子水按1:4稀释BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml去离子水);用250ul结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml;取100ul的细胞悬液于5ml流式管中,加入5ulAnnexinV-FITC,轻轻混匀;室温(20-25℃)避光孵育10min;上机前5min加入10ul碘化丙啶溶液,轻轻混匀;上机前在反应管中补加400ulPBS重悬细胞,避光保存,随即进行流式细胞仪(FACS)检测,AnnexinV-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光.

  因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一!AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光(FITC)标记,以标记了的AnnexinV作为探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生!碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红!

郑州悬浮细胞凋亡检测蛋白

  微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用.PropidiumIodide(PI)有毒,操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触.AnnexinV-FITC中含有剧毒成分叠氮化钠(NaN3),操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。本试剂盒用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1x10染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加.AnnixinV检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞,如:淋巴细胞等细胞的检测。

  因此采用AnnexinV与PI双染的方法,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来.试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C操作说明:细胞样品的准备:a)悬浮细胞:1)收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min,小心去除上清。

  对于贴壁生长的细胞,由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤,会造成较高的假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测,可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤!尽管目前,包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞。我不推荐用该方法检测!因为其重复性较差,且需要操作时非常小心!消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解AnnexinV-FITC,终导致染色失败!细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品.自2012年起,中央财政对医学类本科、硕士、博士教育生平均拨款标准分别从1.4万元、1万元、1.35万元提高到2.7万元、2.2万元和2.8万元,达到各科类培养学生的高生均标准。建立住院医师规范化培训和助理全科医生培训经常性补助机制,累计投入136亿元支持住院医师规范化培训制度建设,投入95亿元建设了559个全科医生临床培养基地,投入近50亿元加强各类医疗卫生人员岗位培训。30个省份对住院医师规范化培训给予财政投入,10多个省份提高了本省医学类生均拨款标准,多年来医学教育投入不足的问题正在逐步缓解。