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广州流式细胞凋亡检测多少钱_深圳常用细胞凋亡检测实验步骤_深圳市安培生物科技有限公司

来源:深圳市安培生物科技有限公司 发布时间:2021-10-12 点击:1100 点赞: 50
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  因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一!AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光(FITC)标记,以标记了的AnnexinV作为探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生.碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

  因此采用AnnexinV与PI双染的方法,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来.试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C操作说明:细胞样品的准备:a)悬浮细胞:1)收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min,小心去除上清.

  试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C所需实验器材:微量移液器;PBS;不含EDTA的胰酶消化液;低速离心机;流式细胞仪注意事项:此试剂盒仅供研究使用。

  微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用!PropidiumIodide(PI)有毒,操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触.AnnexinV-FITC中含有剧毒成分叠氮化钠(NaN3),操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触!本试剂盒用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1x10染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加!AnnixinV检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞,如:淋巴细胞等细胞的检测!

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  注:加入的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞,另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶;残留的胰酶会消化并降解后续加入的AnnexinV-FITC导致染色失败!4)用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!5)再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清.用去离子水按1:4稀释BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml去离子水);用250ul结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml;取100ul的细胞悬液于5ml流式管中,加入5ulAnnexinV-FITC,轻轻混匀;室温(20-25℃)避光孵育10min;上机前5min加入10ul碘化丙啶溶液,轻轻混匀;上机前在反应管中补加400ulPBS重悬细胞,避光保存,随即进行流式细胞仪(FACS)检测,AnnexinV-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光!

  2)用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!3)再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。b)贴壁细胞:1)吸出细胞培养液至离心管中,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞!2)室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化!3)加入以上步骤中收集的细胞培养液,稍混匀,转移到离心管内,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!  在创新战略上,复宏汉霖采用先通过改进原研药、小规模创新,逐渐积累技术和经验,通过前期重金投入,短期内组建起了成熟的研发团队,在中国上海、美国加州和台北均设有研发实验室,配备了单抗药物前期研发所需的符合国际化标准的各项仪器设备,建立了从单抗前期筛选、细胞株开发、细胞培养工艺研究到下游蛋白纯化、制剂开发、生产规模放大等一体化等完善的药物开发平台。在质量上,复宏汉霖选择对标国际高标准,并高度重视工艺开发和产业化,是目前国内为数不多的同步开发自己细胞培养基、并使用一次性工艺研发生产单抗药物的企业之一。