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郑州肿瘤细胞凋亡检测蛋白_吉林贴壁细胞凋亡检测技术_深圳市安培生物科技有限公司

来源:深圳市安培生物科技有限公司 发布时间:2021-10-12 点击:1100 点赞: 50
联系:郑华伟 手机:19126518388 地址:深圳市宝安区新安街道宝民社区创业二路5号建设银行楼创业二路5-1

  因此AnnexinV被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之AnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒将AnnexinV进行绿色荧光(FITC)标记,以标记了的AnnexinV作为探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生!碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红.

  对于贴壁生长的细胞,由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤,会造成较高的假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测,可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤!尽管目前,包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞!我不推荐用该方法检测!因为其重复性较差,且需要操作时非常小心!消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解AnnexinV-FITC,最终导致染色失败!细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品!

郑州肿瘤细胞凋亡检测蛋白

  2)用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。3)再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!b)贴壁细胞:1)吸出细胞培养液至离心管中,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞!2)室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化.3)加入以上步骤中收集的细胞培养液,稍混匀,转移到离心管内,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!

  因此采用AnnexinV与PI双染的方法,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C操作说明:细胞样品的准备:a)悬浮细胞:1)收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min,小心去除上清!

  微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用。PropidiumIodide(PI)有毒,操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触!AnnexinV-FITC中含有剧毒成分叠氮化钠(NaN3),操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触!本试剂盒用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1x106!染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加!AnnixinV检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞,如:淋巴细胞等细胞的检测。

  试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C所需实验器材:微量移液器;PBS;不含EDTA的胰酶消化液;低速离心机;流式细胞仪注意事项:此试剂盒仅供研究使用.