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郑州悬浮细胞凋亡检测实验步骤_南京细胞凋亡检测实验双染色法_深圳市安培生物科技有限公司

来源:深圳市安培生物科技有限公司 发布时间:2021-10-12 点击:1100 点赞: 50
联系:郑华伟 手机:19126518388 地址:深圳市宝安区新安街道宝民社区创业二路5号建设银行楼创业二路5-1

  2)用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清.3)再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清.b)贴壁细胞:1)吸出细胞培养液至离心管中,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量不含EDTA的胰酶细胞消化液消化细胞.2)室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液!需避免胰酶的过度消化.3)加入以上步骤中收集的细胞培养液,稍混匀,转移到离心管内,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清。

  因此采用AnnexinV与PI双染的方法,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来!试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C操作说明:细胞样品的准备:a)悬浮细胞:1)收集细胞至离心管中1000-2000rpm离心5min,小心去除上清!

郑州悬浮细胞凋亡检测实验步骤

  对于贴壁生长的细胞,由于在胰酶等消化处理过程中会造成细胞膜的损伤,会造成较高的假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测,可将胰酶消化后的细胞保存在含2%BSA的PBS中,防止进一步的损伤!尽管目前,包括国外也有一些单位采用该方法检测贴壁生长的细胞!我不推荐用该方法检测!因为其重复性较差,且需要操作时非常小心.消化贴壁细胞残留的胰酶会消化并降解AnnexinV-FITC,终导致染色失败!细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品.

  注:加入的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞,另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶;残留的胰酶会消化并降解后续加入的AnnexinV-FITC导致染色失败.4)用1ml4℃预冷PBS轻轻重悬细胞并计数,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!5)再加入1ml4℃预冷的PBS重悬细胞,1000-2000rpm离心5min,小心吸除上清!用去离子水按1:4稀释BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml去离子水);用250ul结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度为1×106/ml;取100ul的细胞悬液于5ml流式管中,加入5ulAnnexinV-FITC,轻轻混匀;室温(20-25℃)避光孵育10min;上机前5min加入10ul碘化丙啶溶液,轻轻混匀;上机前在反应管中补加400ulPBS重悬细胞,避光保存,随即进行流式细胞仪(FACS)检测,AnnexinV-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。

   深圳市安培生物科技有限公司安培生物科技,我们巍峨耸立于深圳市宝安区新安街道宝民社区创业二路5号建设银行楼创业二路5-1,我们在这里等待您的到来。 也可以通过电话联系: 联系方式:19126518388 联系人:华伟 致电我们,有意向不到的惊喜!

  微量试剂需离心数秒将试剂收集至管底后再开盖取用!PropidiumIodide(PI)有毒,操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。AnnexinV-FITC中含有剧毒成分叠氮化钠(NaN3),操作时要带手套,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。本试剂盒用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不应低于1x106!染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。AnnixinV检测凋亡细胞的方法适用于悬浮生长的细胞,如:淋巴细胞等细胞的检测!

  试剂盒组份:Reagents/20assays/50assays/100assays/StorageAnnexinV-FITC产品货号:FI001/100μl/250μl/500μl/4°C避光PropidiumIodide,PI产品货号:PI002/200μl/500μl/1000μl/4°C避光BindingBuffer(4×)产品货号:BU002/4ml/10ml/20ml/4°C所需实验器材:微量移液器;PBS;不含EDTA的胰酶消化液;低速离心机;流式细胞仪注意事项:此试剂盒仅供研究使用!